Detecting Toll-Like Receptor 8

Abstract

Toll-lignende reseptorer (TLR)er er reseptorer i det iboende immunsystemet som kan binde et bredt utvalg av mikrobe-tilknyttede molekylære mønstre (MAMP)s. Ved deres aktivering, utløses et bredt spekter av cellulære funksjoner og immunresponser blir ignangsatt. Disse cellulære signalveiene kan hjelpe i å bekjempe infeksjoner og kreft, men kan også kapres av patogener og virke i en ondartet måte. TLR8 er en intracellulær TLR som har fått mindre oppmerksomhet enn de fleste andre TLRer, men har fått et større søkelys over seg de siste årene. Deteksjon av TLR8 ved hjelp av ulike metoder er tilgjenglige. Revers transkripsjon og kvantitativ polymerase kjedereaksjon (RT-qPCR) kan detektere TLR8 på et transkriptnivå, og western-blotting kan detektere på proteinnivå. Likevel er det enda ikke slik at TLR8-deteksjon i heterogene prøver er muliggjort ved bruk av metoder som ikke krever større bruk av midler. Flow-cytometri er et vidstrakt verktøy som muliggjør stratifisering av subpopulasjoner i heterogene prøver. Denne studien hadde som mål å utvikle en metode for å detektere TLR8 ved hjelp av flow cytometri. Her presenteres en metode som mulig kan identifisere TLR8 intracellulært i primære immunceller. Denne metoden kan også modifiseres til å evaluere overflate-TLR8 i heterogene prøver. I tillegg presenteres to PCR primere som spesifikt amplifiserer TLR7- og TLR8-transkript.

Toll-like receptors (TLRs) are receptors of the innate immune system that sense a wide range of microbe assosiated molecular patterns. Upon their activation a host of cellular functions and immune responses are initiated. These cellular pathways can aid in fending off infections and cancer, or can be highjacked by pathogens or be pro-malignant. TLR8 is an intracellular TLR that has been somewhat under the radar compared to most other TLRs, but has gained more attention in recent years. Detection of TLR8 by various means are available such as reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), detecting TLR8 on a trascript-level, and western blotting on a protein-level. Still, understanding of TLR8-expression in heterogeneous samples is not possible by use of low-cost methods. Flow cytometry is a highly disseminated tool that allows for stratification of cellular samples into subpopulations. This study sought to develop a method for detecting TLR8 by flow cytometry. Presented herein is a method that may be able to detect TLR8 intracellularly in primary immune cells. This possible method could also be used to assess surface-TLR8 in heterogeneous samples. In addition, primers that can detect TLR7 and TLR8 using RT-qPCR have been identified.