Aeromonas arter fra spiseklare salatblandinger -identifisering og karakterisering av isolater.

Abstract

Aeromonas spp. er vidt utbredt i naturen, og kan isoleres fra akvatiske miljøer. Aeromonas spp. er en anerkjent opportunistisk patogen, som kan formere seg og vokse ved temperaturer mellom 4 and 37 grader. Av den grunn, utgjør denne bakterien en fare for folkehelsen, med tanke på forringelse og mattrygghet av produkter som lagres ved kjøletemperatur, deriblant spiseklare salatblandinger.

Spiseklare produkter blir stadig mer populære, da de er praktiske og sunne alternativer til forbrukeren i en travel hverdag. I de siste årene, har både salg og produksjon av slike produkter økt og en større økning forventes i fremtiden. Matbårne patogener kan forekomme i spiseklare salatblandinger, og en rekke utbrudd av matbåren sykdom har blitt sporet til spiseklare grønnsaker. Kontaminasjon forårsaket av Aeromonas spp. kan forekomme ved ulike ledd i produksjonskjeden, hvorav dårlig vannkvalitet anses som den viktigste kilden til forringelse forårsaket av Aeromonas spp. Gastroenteritt er den vanligste infeksjonen forårsaket av Aeromonas spp., og forekommer både hos friske individer, og blant utsatte grupper som har svekket immunforsvar.

Målet med denne oppgaven var å identifisere og karakterisere tidligere isolerte Aeromonas spp. fra spiseklare salatblandinger produsert av fire lokale produsenter. Isolatene var en del av et tidligere prosjekt ved Norges teknisk-naturvitenskapelige universitet (NTNU), «Lokale spiseklare produkter - mattrygghet langs hele verdikjeden». Oppgaven var delt i fire deler. Aller først ble vekst av Aeromonas isolatene analysert etter flere års lagring ved -80 C. Videre ble identifisering av isolatene utført ved hjelp av biokjemiske og molekylære metoder. De identifiserte artene ble deretter analysert for tilstedeværelse av virulensgener som har blitt beskrevet for Aeromonas arten. Til slutt ble det gjennomført et lagringsforsøk, hvor vekstegenskapene til noen utvalgte isolater ble undersøkt.

Resultatene viste at DNA ikke ble degradert etter flere års lagring ved -80 grader. En kombinasjon av biokjemiske- og molekylære metoder var viktige verktøy som identifiserte artene på slekt- og artsnivå. Alle isolatene hadde tilstedeværelse av ulike virulensgener som ble analysert i denne oppgaven, og en andel var hemolytiske. Flere faktorer som blant annet, naturlig mikroflora, lagringsforhold, naturlige komponenter i produktene, og andre før- og etter høstings prosesser kan ha påvirket veksten av Aeromonas spp. under lagringsforsøket.

Flere studier som analyserer vekst av Aeromonas spp. er nødvendige. Tilsvarende behøves det flere studier for å verifisere identifikasjonsresultatene funnet i denne oppgaven.

Aeromonas spp. are ubiquitous bacteria in all environments, and can be isolated from aquatic habitats. Aeromonas spp. are recognized opportunistic pathogens, with the ability to grow at a temperature range for growth between 4 and 37 degrees. Aeromonas spp. can cause food spoilage, and represent a potential risk to consumers health due to their pathogenicity and ability to grow at refrigeration temperatures.

Ready-to-eat (RTE) fruits and vegetables are an important and rapidly growing class of foods because of their convenience, and noted health benefits. The production and sale of such products has increased and a further increase is expected in the future. Foodborne pathogens can be present in RTE vegetables, and a number of outbreaks of foodborne disease have been traced to RTE vegetables because they are susceptible to contamination at several stages of production. The risks associated with water employed in the production of leafy vegetables must be identified, as the use of water containing pathogens in edible crops may result in contamination of the crop. Gastroenteritis is the most common infection caused by Aeromonas spp., and is associated with the consumption of large numbers of bacteria by both immune-competent and immune-compromised individuals.

The objective of this work was to characterize and identify Aeromonas spp. isolated from ready-to-eat lettuce products. The isolates were part of an earlier project «Lokale spiseklare produkter - mattrygghet langs hele verdikjeden» at the Norwegian University of Science and Technology (NTNU). The work was divided in four parts. First, growth of Aeromonas isolates was analyzed after several years of storage at -80 C, and the isolates were thereafter identified by biochemical and molecular methods. The identified isolates were further analyzed for prevalence of virulence characteristics described for the Aeromonas genus. Lastly, growth characteristics of selected isolates from the four producers we evaluated.

The overall results showed that storage of bacterial samples at below 80 degrees kept the DNA intact. Furthermore, a combination of traditional biochemical and modern molecular methods were powerful tools that identified Aeromonas species at genus and genospecies level. All isolates harbored several of the virulence genes analyzed in this work, and a proportion were hemolytic. The growth of Aeromonas spp. seems to be highly affected by several factors, including natural microbiota, plant composition content, storage conditions, and pre- and post-harvesting processes. However, further studies that assess the growth of Aeromonas species under stimulated storage conditions are necessary. Moreover, further identification and characterization studies are necessary to verify the identification results found in this work.