Insulin i morsmelk - metodeutprøving ved bruk av ELISA

Abstract

I denne oppgaven ble det undersøkt om det kan benyttes fullmelk eller fortynnet fullmelk ved analysering av insulin i morsmelk ved bruk av enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Det har tidligere blitt analysert på skummet melk, men dette krever mye tid og ressurser. Formålet med denne oppgaven var derfor å undersøke om fullmelk kan benyttes til insulinanalyser ved bruk av ELISA i morsmelk.

Metoden som ble benyttet er ELISA på instrumentet Dynex DS2. Det ble analysert fullmelk, fortynnet fullmelk og skummet melk på samme pasientprøve for å undersøke presisjonen til de ulike typene morsmelk. Resultatene vi fikk ble brukt til å beregne variasjonskoeffisient (CV) for hver metode slik at det kunne undersøkes hvilken metode som hadde best presisjon.

Etter utprøving på ulike volumer og fortynninger for å finne den optimale metoden, viste resultatene god presisjon for alle de tre typene morsmelk. Presisjonen ble undersøkt ved å sammenlikne beregnet CV mot kravet for repeterbarhet for insulin i serum/plasma på 6,35%. For fullmelk ble beregnet CV på 2,22%. CV for fortynnet fullmelk ble 3,94% og skummet melk ble 1,89%.

Siden alle de tre typene morsmelk hadde presisjon innenfor kravet for repeterbarhet, kan alle metodene benyttes. Fullmelk krever mindre forarbeid og er mer biologisk riktig å analysere på ettersom det er fullmelk spedbarn drikker. Vi har dermed funnet ut at den mest hensiktsmessige metoden for å analysere insulin i morsmelk ved ELISA, er å benytte fullmelk med et prøvevolum på 200 µL i hvert kryorør i prøvestativet.

In this thesis, it was studied whether whole milk or diluted whole milk can be used when analyzing insulin in human milk with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Insulin in human milk has previously been analyzed using skimmed milk, but this requires time and resources. The purpose of this study was therefore to investigate whether whole milk can be used.

The method used is ELISA on the instrument Dynex DS-2. Whole milk, diluted whole milk and skimmed milk were analyzed on the same sample to determine the precision of the different types of human milk. The results we obtained were used to calculate the coefficient of variation (CV) of each method so that it could be investigated which method had the best precision.

After testing different volumes and dilutions to find the optimal method, the results showed good precision for all three types of human milk. The precision was examined by comparing the calculated CV against the requirement for repeatability for insulin in serum/plasma of 6.35%. For whole milk a CV of 2.22% was calculated. CV for diluted whole milk was 3.94% and skimmed milk was 1.89%.

Since all three types of breast milk had precision within the requirement for repeatability, all methods can be used. Whole milk requires less preparation, and it would be more biologically correct to use since infants consume whole milk. We have thus found that the most appropriate method for analyzing insulin in breast milk is to use whole milk, with a sample volume of 200 µL in each cryotube in the sample rack.