Effekten av Ivermectin på opp- og nedreguleringen av apoptose hos A549 cellelinjen målt med SDS-PAGE og Western Blot

Abstract

Målet med denne studien var å undersøke effekten av Ivermectin på reguleringen av apoptosemarkørene Bax og Bcl-2 i A549 cellelinjen. Dette ble utført for å forstå hvordan Ivermectin påvirker apoptotiske mekanismer, og hvorvidt det fører til opp- eller nedregulering av disse proteinmarkørene. A549 celler ble behandlet med 5 μM Ivermectin over tidsintervaller på 24 og 72 timer for å bestemme kort- og langsiktige effekter. I første delen av studien ble de ulike prosedyrene optimalisert, som cellevekst, SDS-PAGE og Western Blot. Cellelyseringsprosessen for A549 cellene ble også optimalisert, etterfulgt av måling med QubitTM 4 fluorometer og QubitTM Protein BR Assay Kit. I studiens hoveddel ble fire cellebrett med seks brønner dyrket for hvert tidsintervall, hvorav fire brønner inneholdt Ivermectin, videre var det to kontroller; en med DMSO fortynnet i vekstmedium og en med kun vekstmedium. Proteinene ble separert ved hjelp av SDS-PAGE og videre analysert med Western Blot for identifisering. Resultatene ble analysert ved å sammenligne membranene fra de ulike intervallene for å identifisere endringer i proteinbåndenes intensitet. A549 cellene som var behandlet med Ivermectin viste ikke signifikante endringer i apoptosemarkørene Bax og Bcl-2. Bax ble detektert, men det var ingen forskjell mellom behandlet og ubehandlet gruppe. Bcl-2 viste ingen bånd for verken behandlet eller ubehandlet gruppe. En svakhet med denne studien var mangel på tilstrekkelig optimalisering for å kunne vurdere effekten av Ivermectin på A549 cellene.

The aim of this study was to investigate the effects of Ivermectin on the regulation of apoptosis markers Bax and Bcl-2 in the A549 cell line. The reasoning for this was understanding the effects of Ivermectin on apoptotic mechanisms, and whether it can lead to an up- or downregulation of the aforementioned protein markers. A549 cells were treated with 5 μM Ivermectin at time intervals of 24 and 72 hours to determine its short- and long-term effects. In the first part of the study various procedures were optimized, including cell growth, SDS-PAGE, and Western Blot. The cell lysis process was also optimized for A549 cells, subsequently followed by protein quantification with QubitTM 4 fluorometer and QubitTM Protein BR Assay Kit. In the main part of the study, four cell plates with six wells were cultured for each time interval, with four wells containing Ivermectin, along with two controls: one with DMSO diluted in growth medium and the other containing only growth medium. Proteins were separated using SDS-PAGE and further analyzed with Western Blot for identification. The results were analyzed by comparing the membranes from the different intervals to identify up- and downregulation of protein bands on the membranes. A549 cells that were treated with Ivermectin did not show significant changes in the regulation of apoptosis markers Bax and Bcl-2. Bax was detected but did not show to a change between samples treated with Ivermectin and those without. Bcl-2 did not exhibit any bands for either samples, both the ones treated with Ivermectin and those that didn’t. A flaw in this study was a lack of optimization to assess the effect of Ivermectin on A549 cells.