Utprøving og validering av en kommersiell HPV genotypetest til bruk på formalinfiksert og parafininnstøpt vev

Abstract

Livmorhalskreft er den fjerde mest vanlige kreftformen blant kvinner på verdensbasis. I omtrent 95% av tilfellene skyldes sykdommen en persisterende infeksjon med HPV. Av de rundt 650 krefttilfellene som skyldes HPV i Norge, er rundt 365 tilfeller av livmorhalskreft, mens resten er andre kreftformer som kreft i anus, penis og svelg. Deteksjon av HPV-genotyper er viktig for pasienter med kreft og forstadier til kreft som ikke tidligere har blitt testet for HPV, eller som har negativ HPV-screening. Resultatene er av betydning for prognose og behandling.

I dette prosjektet ble Anyplex II HPV28 Detection utprøvd og validert for FFPE-prøver (formalinfikserte, parafininnstøpte prøver) ved St. Olavs Hospital. Totalt 15 kjente og 10 ukjente prøver ble analysert. De kjente prøvene hadde tidligere blitt analysert med Anyplex II HPV28 Detection på FFPE-prøver ved Akershus Universitetssykehus. Det ble også utført analyse av en fortynningsrekke ned til en 1000x fortynning av positiv kontroll.

Resultatene fra St. Olavs Hospital hadde for det meste samsvar med resultatene fra Akershus Universitetssykehus for de kjente prøvene. Noen av prøvene hadde flere genotyper detektert hos Akershus Universitetssykehus enn hos St. Olavs Hospital, og noen hadde flere genotyper detektert hos St. Olavs Hospital enn hos Akershus Universitetssykehus. Uoverensstemmelsene skyldtes trolig at ikke samme isolat ble benyttet ved begge sykehus, og var derfor ikke uventet. HR-HPV ble detektert i alle ukjente prøver, som gjenspeiler rutineprøver og er prøver med dysplasi som mistenkes å være HPV-relatert. Dette resultatet var derfor forventet. Alle HPV-genotyper ble detektert ned til en 500x fortynning av positiv kontroll, noe som viser at positiv kontroll er svært konsentrert.

På bakgrunn av forventede resultater i analyse av kjente og ukjente prøver, konkluderes det med at Anyplex II HPV28 Detection kan benyttes på FFPE-prøver ved St. Olavs Hospital. Det anbefales å fortynne positiv kontroll før bruk for å unngå falsk trygghet og redusere risiko for kontaminering av øvrige prøver.

Cervical cancer is the 4th most common cancer in women worldwide. 95% of cervical cancer cases are related to a persistent infection with HPV. About 650 cancer cases each year in Norway are related to HPV, in which about 365 are cases of cervical cancer. The remaining cases include cancer of the anus, penis and throat. HPV genotype detection is an important examination for patients which have not previously been tested, or which are screened negative for HPV. The results are relevant for prognosis and treatment.

In this project, Anyplex II HPV28 Detection were tested and validated for FFPE-samples at St. Olavs Hospital, Trondheim University Hospital. 15 known and 10 unknown FFPE samples were tested. The known samples were previously tested at Akershus University Hospital with Anyplex II HPV28 Detection. A dilution series down to 1000x dilution of the positive control were analyzed.

Results of known samples from Akershus University Hospital mostly matches results from St. Olavs Hospital, Trondheim University Hospital. In some samples, there are detected more HPV genotypes in Akershus compared to Trondheim, and in other samples more HPV genotypes are detected in Trondheim compared to Akershus. As different isolates from the FFPE sample are made in Akershus and Trondheim, the mismatch is not unexpected. High risk HPV genotypes are detected in all the unknown samples. The unknown samples, samples with suspected HPV related dysplasia, reflects routine samples in Trondheim. High risk HPV genotypes in these samples are expected. All HPV genotypes are detected in a 500x dilution of the positive control. This indicates that the positive control is highly concentrated.

With expected results of both known and unknown samples, the conclusion is that Anyplex II HPV28 Detection can be used for FFPE samples at St. Olavs Hospital, Trondheim University Hospital. It is recommended to make a dilution of the positive control to avoid false safety and to reduce the risk of contamination in following samples.