Tilleggsvalidering av GC-MS metode for kvantifisering av THC i fullblod ved bruk av standardrekke i serum

Abstract

I denne oppgaven ble det gjennomført en tilleggsvalidering av metode for kvantifisering av THC i fullblod. THC er et av virkestoffene i cannabis og bestemmes i post mortem blod ved analyse på gasskromatografi med massespektrometri (GC-MS). Formålet med oppgaven var å undersøke om det er mulig å benytte standardrekke i serum for måling av THC i blod, da det vil være mindre ressurskrevende enn å bruke fullblod. Det ble også gjennomført en holdbarhetsundersøkelse for å se om tin og frys sykluser påvirker THC-konsentrasjonen.

Metodens prøveopparbeidelse var væske-væske ekstraksjon, fast-fase ekstraksjon og derivatisering, og analyseprinsippet var (GC-MS). Det ble gjennomført en forenklet validering, som innebar undersøkelse av laveste kvantifiseringsgrense, reproduserbarhet, signalstyrke og en metodesammenlikning mellom de to ulike standardkurvene. Resultater for standarder, kontroller og prøver ble vurdert opp mot Avdeling for klinisk farmakologi sine akseptkriterier.

Resultatene viste at krav for laveste kvantifiseringsgrense, reproduserbarhet, nøyaktighet og kurvetilpasning, på henholdsvis S/N ≥ 30, CV ≤ 15% og avvik ≤ 20%, ble innfridd. Metodesammenlikningen viste godt samsvar mellom standardkurven i serum og standardkurven i fullblod. Resultatene fra holdbarhetsundersøkelsen viste at THC innfridde akseptkriteriene på CV ≤ 15% og relativt avvik ≤ 20%, etter tre tin og frys sykluser.

Standardkurven i serum kan erstatte standardkurven i fullblod ved bestemmelse av THC i fullblod med GC-MS. THC konsentrasjonen i fullblod ble ikke påvirket nevneverdig av gjentatte tin og frys sykluser, men prøvematerialet oppførte seg annerledes under prøveopparbeidelsen. Det anbefales at disse observasjonene undersøkes nærmere.

For this thesis an additional validation for quantitation of THC in blood was carried out. THC is an active component in cannabis and is quantitated in post-mortem blood by analysis with gas chromatography in combination with mass spectrometry (GC-MS). The purpose of the thesis was to investigate whether it is possible to use calibration standards from serum for quantitation of THC in whole blood, as this will be less demanding than using blood. Additionally, a stability study was carried out to determine how the concentration of THC is affected by several freeze and thaw cycles.

The sample preparation used for the method was liquid-liquid extraction, solid-phase extraction and derivatization, the principle of analysis was GC-MS. A simplified validation was carried out. This entailed examination of the lowest quantification limit, reproducibility, signal, and method comparison of the two types of calibration curves. The results for the calibration standards, quality controls and samples were evaluated according to the acceptance criteria from the department of Clinical Pharmacology (AKF).

The results fulfilled the criteria for lowest limit of quantification, reproducibility, and accuracy with S/N ≤ 30, CV ≤ 15% and deviation ≤ 20%, respectively. The blood and serum calibration-curve comparison showed good compliance between the two calibration-standard curves from serum and blood. The THC results from the stability study met the criteria of CV≤15% and deviation≤20% three thaw and freeze cycles.

Calibration curves in whole blood can be replaced by serum when samples of THC in post-mortem blood are by GC-MS. The stability study showed that repeatedly thawing and freezing of the samples did not affect the concentration of THC. Observations during the sample preparation for the durability study showed that the frozen samples material behaved differently from the non-frozen samples. Further studies on this observation is recommended.