Immunhistokjemisk påvisning av mismatch repair-proteiner

Abstract

Bakgrunn: Immunhistokjemisk farging av vevssnitt kan påvise mismatch repair (MMR)- proteinene MLH1, PMS2, MSH2 og MSH6, som normalt uttrykkes i cellekjernen. Tap av en eller flere av disse kan indikere Lynch syndrom. Hensikten med studien var å optimalisere protokoller for å kunne detektere MMR-proteinene ved bruk av primærantistoffene anti-MLH1, anti-PMS2, anti-MSH2 og anti-MSH6. Materiale og metode: Det ble benyttet formalinfikserte, parafininnstøpte vevsbiter fra 17 pasientprøver, hovedsakelig fra tykktarm, men også fra uterus, tynntarm, rektum og ventrikkel. Disse prøvene var tidligere vurdert, og åtte prøver hadde normalt proteinuttrykk for MLH1, PMS2, MSH2 og MSH6, mens de resterende ni prøvene hadde tap av MLH1 og PMS2 eller MSH2 og MSH6. Metoden som ble anvendt var immunhistokjemisk farging på BenchMark Ultra (Ventana/Roche). Resultat:De fire primærantistoffene påviste MMR-proteinene, og det ble utarbeidet fire optimaliserte protokoller. Den mest optimale protokollen for anti-MLH1 har forbehandlingstid på 64 minutter, inkubasjonstid med antistoff på 32 minutter og amplifisering på 4 minutter. For anti-PMS2 ble forbehandlingstiden 92 minutter, inkubasjonstid med antistoff 40 minutter og amplifisering 8 minutter med den mest optimale protokollen. Videre ble forbehandlingstid på 64 minutter og inkubasjonstid med antistoff på 32 minutter mest optimalt for anti-MSH2. For anti-MSH6 ble en protokoll med forbehandlingstid på 64 minutter og inkubasjonstid med antistoff på 12 minutter mest optimalt. Konklusjon: Det ble utarbeidet fire optimaliserte protokoller for hvert av de fire primærantistoffene i samråd med patolog. Protokollene ble verifisert og implementert i rutinediagnostikken av Lynch syndrom ved Enhet for immunhistokjemi, Avdeling for patologi, St. Olavs hospital. Nøkkelord: Lynch syndrom, immunhistokjemi, BenchMark Ultra, mismatch repair-proteiner