| dc.description.abstract | Denne oppgaven er utført som et avsluttende prosjekt for bioingeniørutdanningen ved Institutt for bioingeniørfag, Fakultet for naturvitenskap, Norges teknisk-naturvitenskapelige universitet. Det praktiske laboratoriearbeidet i oppgaven innebar utprøving og optimalisering av protokoll for den immunhistokjemiske fargeanalysen med anti-SOX10. Utprøvingen utføres for at fargeanalysen skal kunne innføres i rutinediagnostikken ved Enhet for immunhistokjemi, Avdeling for patologi, St Olavs hospital.
Fargeanalysen ble utprøvd med forskjellige parametere for å bestemme hva som gir optimal fargekvalitet for anti-SOX10, og disse parameterne innebar valg av reagens og forskjellig forbehandlingstid. Det ble gjort ved bruk av et “Ready to use”-reagens og et konsentrat i ulike fortynninger. I tillegg ble analysen også utprøvd med flere variabler i form av varierende forbehandlingstid og tilleggs-trinn. Deretter ble den optimale protokollen etterprøvd ved å benytte en rekke vevspreparater med ulike diagnoser hvor det forventes både positive og negative resultat.
Under utprøvingen ble det vurdert at RTU-reagenset og konsentrat-fortynningen 1:50 ga best fargeresultat. Ettersom det er mer kostnadseffektivt å benytte RTU-reagenset, og dette reagenset gir gode fargeresultat, anses dette som det optimale reagenset for fargeanalysen. Det ble ikke observert noen nevneverdig redusering i bakgrunnsfarge ved bruk av tilleggs-trinnene som hadde som hensikt å redusere bakgrunnsfarge. Det var heller ingen betydelig forskjell i fargeresultatet mellom de to ulike forbehandlingstidene ved vurdering av fargekvalitet. På grunnlag av dette ble det besluttet å benytte forbehandlingstiden på 32 minutter. Ved etterprøvingen av optimert protokoll var samtlige resultater og kontroller av god kvalitet, og ga forventet resultat.
Det ble konkludert at den optimale protokollen for immunhistokjemisk farging med anti-SOX10 er å benytte RTU-reagenset med antistoffklon SP267, med en forbehandlingstid på 32 minutter og uten tilleggs-trinn, altså protokoll 1 | |
| dc.description.abstract | This thesis is completed as a final project for the Biomedical Laboratory Scientist education program at Department of Biomedical Laboratory Science, Faculty of Natural Sciences, Norwegian University of Science and Technology. The practical laboratory task in this thesis includes trials and optimization of the protocol for the immunohistochemical staining analysis with anti-SOX10. The task is performed in order to adopt the analysis as part of the routine diagnostics at Unit for Immunohistochemistry, Department of Pathology, St Olavs hospital.
The staining analysis was tested with several different parameters in order to achieve the optimized staining quality for anti-SOX10, such as which reagents were to be used and what length of pre-treatment time was to be used. This was done by using a “Ready to use”-reagent, and a concentrate in various dilutions. In addition, other variables were tested, including various lengths of pre-treatment time and different additional steps. Accordingly, the optimized protocol was verified by the usage of numerous tissue samples with various diagnoses where it is expected to be both positive and negative staining results.
During the trials it was evaluated that by usage of the RTU-reagent and the concentrate with the dilution of 1:50 gave the best staining result. Since the RTU-reagent is most cost effective it is therefore considered that this reagent is the best reagent for this analysis. There was not observed any mentionable reduction in background staining by usage of the different additional steps, which purpose it is to reduce this background staining. There was no significant difference for the staining quality when it came to the duration of the two different pretreatment times. Because of this, and the question of price, it was decided to make use of the pretreatment duration of 32 minutes. When the optimized protocol was verified all the staining results of the controls were of good quality and had their expected results.
In conclusion, the optimized protocol for immunohistochemical staining with anti-SOX10 is with usage of the RTU-reagent with the antibody-clone SP267, the pretreatment duration of 32 minutes, and no additional steps, accordingly protocol 1. | |
