| dc.description.abstract | Brystkreft (cancer mammae) er den hyppigste kreftformen hos kvinner, og hvert år dør omtrent 465200 kvinner i verden av sykdommen. Selv om spredning av sykdommen til regionale lymfeknuter er en av de viktigste prognostiske faktorene, viser det seg at opp til 30% av alle lymfeknutenegative pasienter får tilbakefall av sykdommen i løpet av en femårsperiode etter operasjon. Det kan forklares ved at brystkreftceller kan spre seg via en hematogen rute som går utenom den lymfogene ruten, noe som bekreftes av at man har påvist mikroskopisk spredning til blod og benmarg hos lymfeknutenegative pasienter, både før og etter operasjon. Dette omfatter både mikrometastaser, disseminerte (spredte) tumorceller(DTC) i beinmargen og sirkulerende tumorceller (CTC) i blod.
MikroRNA (miRNA) er korte (18-25 nt) RNA molekyler som regulerer genekspresjon. Myetyder på at miRNA vil kunne være ideelle biomarkører i kreftdiagnostisering og måling av behandlingsrespons og prognose.
Målet med oppgaven var å evaluere RT-PCR-basert påvisning av spesifikke miRNA som sykdomsmarkører i beinmarg og plasma fra pasienter med operabel brystkreft og bestemme den prognostiske betydningen av slike funn. Første del av oppgaven omfattet etablering av metodikk for RT-PCR-basert kvantitering av miRNA i et tidligere innsamlet prøvemateriale.To ulike kit for isolering av miRNA ble sammenlignet, miRNeasy Mini Kit fra Qiagen og mirVana PARIS Kit. Av disse ble miRNeasy valgt ut som det beste. Det ble også sammenlignet to ulike metoder for qPCR-påvisning av miRNA, TaqMan MicroRNA Assayssom baserer seg på bruk av TaqMan-prober, og miScript PCR System som bruker SYBRgreen kjemi for deteksjon av PCR-produkt. TaqMan MicroRNA Assays ble valgt til videre analyser.
Markørene miR-10b, miR-21 og mir-195 ble valgt på bakgrunn av tidligere publiserte og upubliserte resultater fra andre forskningsgrupper, mens miR-127, miR-148b og miR-189 ble valgt ut ved å analysere eksisterende miRNA mikromatrisedata. Nivået av de nevnte miRNAble bestemt i beinmarg og i plasma, for å undersøke om de kunne brukes til å påvise tumorceller, eller påvise sirkulerende miRNA, enten frie eller i cellefragmenter eller eksosomer. Ingen av de undersøkte miRNA viste seg å være lovende prognostiske markører,verken i beinmarg eller plasma. Med unntak av mir-189 viste heller ingen av de undersøkte miRNA seg å være gode markører for forekomst av brystkreft. | nb_NO |
