IL-1β og TNF-α indusert genuttrykk av DKK1 og OPG involverer cPLA2-IVα i SW-982 synoviocytter

Abstract

I denne studien har det blitt sett nærmere på cPLA2 sin rolle i reguleringen av signalsporene RANK/RANKL/OPG signalsystemet og Wnt-signalisering ved å detektere og kvantifisere genuttrykket av reseptor aktivator av nukleær faktor kappa-Beta ligand (RANKL), osteoprotegerin (OPG) og dickkopf-1 (DKK1) i SW-982 celler. Primerne brukt i denne studien er egendesignede og har blitt grundig optimalisert via effektivitetskurver, primerdesign kriterier og primerkonsentrasjoner. Ved hjelp av kvantitativt realtime polymerase kjedereaksjon (QPCR) har vi vist at cPLA2-IVα er involvert i reguleringen av OPG og DKK1 genuttrykk i interleukin-1 β (IL-1β) og tumor nekrose faktor α (TNF-α) induserte SW-982 celler. Forsøk med lipopolysakkarid (LPS) i kombinasjon med IL-1β og TNF-α induserte SW-982 celler ble også gjort, men ga ingen signifikante stimuleringer. RANKL er kjent å være svakt uttrykt i flere cellelinjer og dette viste seg å være tilfellet også i SW-982-cellelinjen. Resultater fra forsøkene viser at vi for første gang, har detektert RANKL mRNA i IL-1β og TNF-α induserte SW-982-celler ved bruk av RT-PCR. Det kan bekreftes at RANKL bare detekteres i stimulerte SW-982 celler, under våre forsøksbetingelser. Samtidig har vi også for første gang vist at cPLA2-IVα hemmeren AVX er involvert i transkripsjonsreguleringen av DKK1 og OPG i SW-982 celler. Det mest interessante funnet i denne studien er at AVX alene ikke påvirker det basale uttrykket av OPG eller DKK1 og at AVX i kombinasjon med IL-1β og TNF-α gir to ulike responser.