Multicolor flowcytometrisk immunfenotyping for B-cellepopulasjoner i blod- og benmargsprøver

Abstract

Denne oppgaven har hatt som mål å finne egnete multicolor antistoffkombinasjoner for identifisering av B-cellepopulasjoner i blod og benmarg ved hjelp av flowcytometrisk immunfenotyping. B-cellepopulasjoner av interesse er maligne B-cellekloner ved ulike typer B-cellelymfomer, og i tillegg normale B-cellepopulasjoner i blod som undersøkes i forhold til immunsvikttilstander. Dette innebærer å velge ut passende antistoffkloner og fluorokromer som kan benyttes sammen i antistoffkombinasjoner. For å stadfeste dette er det blitt utført titrering av alle antistoffer og annen kvalitetssikring av kombinasjonene, noe som har vært vellykket med noen få unntak. I tillegg er de nye multicolor-kombinasjonene sammenlignet med gammel metode. De to metodene viser ingen signifikant forskjell fra hverandre på 5 % nivå. For å identifisere maligne B-cellekloner er det tatt utgangspunkt i europeiske retningslinjer utarbeidet av EuroFlow-konsortiumet. Fem multicolor-kombinasjoner er testet ut og tatt i bruk, og ved hjelp av avanserte analysestrategier med spesialtilpasset softwareprogram er det oppnådd å skille mellom seks ulike typer B-cellelymfomer på grunnlag av unike immunfenotypeprofiler ut fra opptil 29 parametre. Diagnose kan settes for fire av de seks B-cellelymfomene ut fra immunfenotypeprofil.Det er også blitt utarbeidet og tatt i bruk to multicolor-kombinasjoner for identifisering av B-cellepopulasjoner i perifert blod. Design av disse kombinasjonene er gjort med utgangspunkt i publikasjoner. Kombinasjonene har vist seg å være egnet for å skille mellom alle B-cellepopulasjoner som er nødvendige for klassifisering av ulike grupper immunsvikt. Det er i tillegg blitt etablert egne normalverdier for normale B-cellepopulasjoner i blod.