Holdbarhetsundersøkelse av ACTH i EDTA-blod oppbevart i romtemperatur

Abstract

Dette Bachelorprosjektet ble utført ved seksjon Generell biokjemi, på Avdeling medisink biokjemi (AMB) ved St. Olavs hospital. Det ble gjennomført en holdbarhetsundersøkelse av adrenokortikotropt hormon (ACTH) i plasma ved romtemperatur for å bevise hvor lenge analytten er holdbart ved romtemperatur før sentrifugering. Dagensrutinen forgår ved å oppbevare prøvene ved romtemperatur inntil 4 timer før sentrifugering og analysering, som går imot referanseprosedyren. Referanseprosedyren sier at prøvene bør tas i et kjølerør og settes på is etter prøvetaking. Om det er umulig å analysere umiddelbart må plasma samles og fryses ved –20 °C. Målet med denne oppgaven er å evaluere om dagens rutiner kan opprettholdes, og finne holdbarhetsgrensen.

Prøvematerialet ble samlet inn fra 23 frivillige deltakere, og det ble benyttet ett 6mL EDTA-rør, og ett forhåndskjølt 4 mL EDTA-rør. 4 mL EDTA-rører fulgte referanseprosedyren, og ble kjølesentrifugert ved 3700rpm i 10 minutter umiddelbart etter prøvetaking. Den ble delt i 7 alikvot navnet A, hvor en av dem ble analysert med en gang, mens de andre ble frosset umiddelbart. 6mL EDTA-prøvet ble fordelt i 8 alikvoter merket B til I. Alikvot B ble analysert umiddelbart, mens de andre fra C til I ble stående i romtemperatur i 0, 90, 120, 150, 180, 240, 300 minutter henholdsvis før sentrifugering ved 3700 rpm i 10 minutter, og deretter ble frosset ned -20 (± 5 °C). Tilhørende prøver av hver pasient som hadde blitt frosset ned ble analysert på samme dag, og tre paralleller ble benyttet for hver av prøvene. Det ble benyttet instrumentet Cobas pro e801 som er en immunoassay- analysator, og batch- metode ble benyttet (for å undersøke holdbarheten) til kvantitering av ACTH.

Ved å benytte tillatt Bias i samsvar med avdeling medisinsk biokjemi på 12 %, falte alle gjennomsnittverdier ± 90 % konfidensintervall av alle oppbevaringstidspunkt innenfor grensen for tillat bias i opptil 4 timer. Ved å bruke en teoretisk beregnet tillatt bias på 10%, ble det observert at prøvene i noen oppbevaringstider ikke lenger var holdbare. Det kan argumenteres for at ACTH- prøven er holdbar inntil 4 timer på 12% bias, og inntil 1,5 timer på 10% bias. Å øke prøvestørrelse kan bidra til å oppnå et mer pålitelig resultat.

This Bachelor's project was conducted at General Biochemistry section within the Department of Medical Biochemistry at St. Olav's hospital in Trondheim. The stability study of adrenocorticotropic hormone (ACTH) in whole blood at room temperature was performed to determine how long the analyte remains stable at room temperature before centrifugation. The daily routine involves storing the samples at room temperature for up to 4 hours before centrifugation and analysis, which contradicts the recommended reference procedure. According to the reference procedure, the samples should be taken in a cooling tube and placed on ice immediately after sampling, if it is impossible to analyse immediately, plasma must be collected and frozen at -20 °C. The aim of this study is to evaluate whether the current routine can be maintained, and to find out the stability limit.

The sample was collected from 23 voluntaries, and one 6 mL EDTA tube and one pre-cooled 4 mL EDTA tube were used. 4 mL EDTA tubes followed the reference procedure and were cold centrifuged at 3700 rpm for 10 minutes immediately after sampling. It was divided into 7 aliquots named A, which one of them was analysed immediately, while the others were frozen immediately. The 6 mL EDTA sample was divided into 8 aliquots labelled B to I. Aliquot B was analysed immediately, while the others from C to I were left at room temperature for 0, 90, 120, 150, 180, 240, 300 minutes respectively before centrifugation at 3700 rpm for 10 min and then frozen to -20 (± 5 °C). Corresponding samples from each patient that had been frozen were analysed on the same day, and three parallels were used for each of the samples. The instrument Cobas pro e801, which is an immunoassay analyser, was used, and stability was investigated using batch-method.

Using bias in accordance with the Department of Medical Biochemistry of 12%, all mean values ± 90% confidence interval of all assay results fell within the limit of allowable bias for up to 4 hours. While using calculated 10% bias, it was observed that the samples were no longer stabile in some storage times. It can be argued that the ACTH test is stabile for up to 4 hours at 12% bias, and for up to 1,5 time at 10% bias. Increasing the sample size can help to achieve a more reliable result.