Validering av metode for kvantifisering av antiepileptika i serum ved bruk av ny detektor (Xevo TQ-XS) på UPLC-MSMS

Abstract

Validering av metode for kvantifisering av antiepileptika (karbamazepin, karbamazepinepoksid, likarbazepin og zonisamid) i serum ble gjennomført på MS-detektoren Xevo TQ-XS. Dette er en ny MS-versjon som skal tas i bruk på laboratoriet i tillegg til detektoren som benyttes i dag, Xevo TQ-S. Xevo TQ-XS har høyere sensitivitet, da den detekterer små analytter med mindre masse. Metodens prøveopparbeidelse var proteinfelling og separasjonsprinsippet var omvendt fase-kromatografi.

Grunnlaget for validering av metoden var knyttet til valideringsparametrene kvantifiseringsgrense, linearitet, reproduserbarhet, nøyaktighet, matrikseffekt, IS-recovery og robusthet. Resultater fra analyse av pasientprøver og sammenlignbare laboratorieprøver (SLP) ble sammenlignet med valideringskrav fra laboratoriet.

Resultatet viser at det er linearitet i konsentrasjonsintervallene for de fire antiepileptika (gjennomsnittlig R = 0,999). Presisjonen til nedre kvantifiseringsgrense for samtlige antiepileptika hadde CV ≤ 2,4 % og nøyaktighet mellom 0,0 – 2,7%. Signal/støy-ratio for hvert antiepileptika lå innenfor intervallet 1900 – 11000. Dette indikerer at bakgrunnsstøy gir tilnærmet ingen effekt for deteksjon av antiepileptika. Reproduserbarheten for samtlige antiepileptika hadde CV ≤ 2,7% og nøyaktighet ≤ 4,2%. Dette indikerer at påvirkning fra dag til dag på Xevo TQ-XS er minimal.

Z-verdier for karbamazepin, likarbazepin og zonisamid innfrir kravet på Z ≤ 2. Karbamazepinepoksid må undersøkes videre (Z ≥ 2). Resultater fra matrikseffekt korrigert med internstandard lå mellom 99 – 103%. Xevo TQ-XS blir lite påvirket av matrikssubstanser. Det er ingen betydelige avvik i IS-recovery eller robusthet (drift). Passing and Bablok regresjonsanalyse viser at det er samsvar mellom detektorene.

Undersøkelsen har vist i sin helhet at resultatene innfrir fastsatte valideringskrav, bortsett fra karbamazepinepoksid (Z ≥ 2). Dette krever videre undersøkelse før Xevo TQ-XS kan anvendes for kvantifisering av antiepileptika i serum.

Method validation for quantification of antiepileptics (carbamazepine, carbamazepinepoxide, licarbazepine and zonisamide) in serum was accomplished on the MS-detector Xevo TQ-XS. This new MS-version is going to be implemented in the laboratory in addition to the detector that is used today, Xevo TQ-S. Xevo TQ-XS has improved sensitivity and can detect small analytes with low molecular mass. The sample preparation used for the method was protein precipitation and the principle for separation was reversed phase chromatography.

The method validation was based on the parameters limit of quantification, linearity, reproducibility, accuracy, matrix effects, IS-recovery and robustness. Results from patient samples and comparable laboratory samples were analyzed and compared with validitation requirements used in the laboratory.

The result shows linearity in the consentration intervals for each antiepileptic (mean R= 0,999). The precision for the low limit of quantification for all the antiepileptics had a CV ≤ 2,4% and accuracy between 0,0 – 2,7%. Signal to noise-ratio for each antiepileptic was between 1900 – 11000. This indicates that background noise has virtually no effect on the detection of antiepileptic drugs. The reproducibility for the antiepileptics has CV ≤ 2,7 and accuracy ≤ 4,2%. This indicates that day-to-day impact on the Xevo TQ-XS is minimal.

Z-values for carbamazepine, licarbazepine and zonisamide meet the requirement Z ≤ 2. Carbamazepinepoxide must be investigated further (Z ≥ 2). Results from matrix effect corrected with internal standard were between 99 – 103%. Xevo TQ-XS is not largely affected by matrix components. There are no notable deviations for IS-recovery or robustness (drift). Regression analysis from Passing and Bablok shows agreement between the detectors.

The assessment shows that the results meet the requirements for validation, except from carbamazepinepoxide (Z ≥ 2). This requires further examination before Xevo TQ-XS can be used for quantification of antiepileptics in serum.