Validering av metoder til analyse av faktor VIII og von Willebrand faktor på nytt ACL TOP 550 koagulasjonsinstrument

Abstract

For å sikre best mulig analytisk kvalitet på medisinske laboratorier er det nødvendig å validere metodene som benyttes. Formålet med denne oppgaven er å validere to analysemetoder på seksjon for hematologi sitt nye ACL TOP 550 koagulasjonsinstrument. Metodene skal valideres ut ifra to parametere – presisjon og riktighet. Analysene som skal valideres er faktor VIII og von Willebrand faktor. Von Willebrand faktor deles inn i vWF aktivitet og antigen. Med dette skal det undersøkes om metodene på nytt instrument har god nok analytisk kvalitet til å kunne erstatte seksjonens nåværende metoder som er i bruk på en eldre modell av samme instrument.

Metodenes presisjon testes ved å undersøke reproduserbarhet og repeterbarhet. Reproduserbarhet testes ved å analysere to interne kontroller i duplikat i 20 dager og repeterbarhet analyseres ved å analysere 20 paralleller av fortynnede pasientprøver i ulik konsentrasjon i løpet av samme dag. Interne og eksterne kontroller analyseres og sammenlignes mot oppgitt fasit for å teste metodenes riktighet. Det utføres også en metodesammenligning der et sett med pasientprøver analyseres på både gammelt instrument på seksjonen og nytt instrument. Analytiske kvalitetskrav til metodene er satt av fagansvarlig bioingeniør og ansvarlig overlege.

Fra presisjonstestingen viser resultatene at metodene på nytt ACL TOP 550 ikke oppfyller kravene satt for reproduserbarhet og repeterbarhet for noen av analysene, noe som tyder på at metodene ikke har tilstrekkelig god nok presisjon til å kunne tas i bruk. Fra riktighetstestingen viser resultatene at de interne kontrollene kan godkjennes for alle analysene i henhold til fastsatte krav. De eksterne kontrollene kan imidlertid ikke godkjennes for noen av analysene. Resultatene fra metodesammenligningen viste at for faktor VIII og vWF aktivitet var avviket mellom målte verdier på de to instrumentene innenfor oppgitte krav, imens avviket var større enn kravet for vWF antigen. Det ble også avdekket at denne analysen har en konstant og systematisk proporsjonal feil.

Resultatene fra testing av presisjon og riktighet til metodene på nytt instrumentet viser at verken presisjon eller riktighet tilfredsstiller kravene som ble satt, noe som tilsier at metodenes analytiske kvalitet per i dag ikke er god nok til å erstatte seksjonens nåværende metoder på eldre instrument.

To assure optimal analytical quality in medical laboratories it is necessary to validate the methods that are utilized. The purpose of this thesis is to validate two methods used by the new ACL TOP 550 coagulation instrument for the hematology section at St. Olav’s hospital. The validation will be focused on analytical accuracy and precision. The assays that will be validated are factor VIII and von Willebrand factor. Von Willebrand factor is divided into two parts - activity and antigen. The results from the validation will determine if the analytical quality of the methods on the new instrument is sufficient enough to replace the sections current methods, which is performed on an older version of the same instrument.

The methods analytical precision was evaluated by examining repeatability and reproducibility. Reproducibility was tested by analyzing duplicate parallels of two internal quality controls over the course of 20 days. Repeatability was tested by analyzing 20 parallels of patient samples containing different concentrations of the analyte, on the same day. The analytical accuracy of the methods was tested by analyzing internal and external quality controls and comparing the results to the values stated by the manufacturer. Lastly a method comparison between the methods on the new instrument and the methods on the older instrument was executed by analyzing a set of patient samples on both instruments and comparing the results. The analytical requirements for the instrument were established by the section’s supervising biomedical laboratory scientist and chief physician.

The results from the precision testing displayed that the methods did not meet the established analytical requirements for repeatability and reproducibility for any of the assays. This suggests that the new methods precision is not good enough to be applied by the section yet. The results from the accuracy testing displayed that all internal quality controls were within the established analytical requirements. The results from the analysis of the external quality controls were not within the established analytical requirements for any of the assays. For factor VIII and vWF activity, the results from the method comparison displayed that the difference between the methods were within the established analytical requirements. For vWF antigen, the difference between the methods exceeded the established analytical requirements. It was also uncovered that this assay has both a constant error and a systematic proportional error.

The results from the examination of the new methods analytical accuracy and precision shows the analytical quality of the new methods is not satisfactory and can therefore not replace the sections current methods at this point.