Utvikling og prevalidering av en sammenslått metode for kvantifisering av lamotrigin og mykofenolsyre i serum på UPLC-MSMS

Abstract

Ved Avdeling for Klinisk Farmakologi (AKF) på St. Olavs Hospital blir de opprinnelige metodene for kvantifisering av lamotrigin og mykofenolsyre analysert daglig. Metodene benytter væskekromatografi og tandem massespektrometri for å kvantifisere analyttene. I denne bacheloroppgaven ble en ny og sammenslått metode for å analysere lamotrigin og mykofenolsyre i serum utviklet og prevalidert.

Hensikten med prosjektet var å undersøke om de ulike metodene kunne slås sammen til én felles metode. Ved å sammenfatte metodene vil varekostnader reduseres og arbeidskapasitet forbundet med daglig opparbeidelse og analysering frigjøres. I tillegg vil en sammenslåing av metodene føre til bedre kapasitet på analyseinstrumentet.

Det ble undersøkt om analyttene kunne detekteres i samme metode uten å forringe den analytiske kvaliteten, ved å ta utgangspunkt i dagens metode for lamotrigin i serum. Metoden for mykofenolsyre hadde et kvantifiseringsion som ga signal over lineært måleområde for den sammenslåtte metoden, og det var derfor nødvendig å kartlegge alternative kvantifiseringsion. Deretter ble instrumentinnstillinger optimalisert for å kunne skille og detektere kvantifiseringsionene til begge analyttene i samme metode. Dette inkluderte forsøk med ulike varianter av prøveopparbeidelse og ulike injeksjonsvolum.

Etter endt metodeutvikling ble en prevalidering utført for å undersøke hvor egnet den optimaliserte metoden var for en fullstendig validering. Prevalideringen viste at metodens riktighet, repeterbarhet og linearitet i måleområdet var godt innenfor akseptkriteriene. Spesifisitetsforsøkene viste at verken internstandard eller matriks førte til interferens av analyttsignal. Ved å vurdere utbytte for metoden ble det vist at prøveopparbeidelsen ikke førte til betydelig tap av analytt. I tillegg viste prevalideringen at ferdig opparbeidede prøver hadde god holdbarhet ved reinjeksjon etter tre dager på instrumentet.

På grunnlag av resultatene fra metodeutvikling og prevalidering kan analyttene lamotrigin og mykofenolsyre kvantifiseres i en sammenslått metode, uten at det går på bekostning av analytisk kvalitet. Metoden er med dette egnet til en fullstendig validering, og anses som et mulig alternativ til dagens enkeltanalyser.

At the Department of Clinical Pharmacology (AKF) at St. Olav's Hospital, the original methods for quantification of lamotrigine and mycophenolic acid are analyzed daily. The methods use liquid chromatography and tandem mass spectrometry to quantify the analytes. In this bachelor thesis, a new and merged method for quantification of lamotrigine and mycophenolic acid in serum was developed and prevalidated.

The purpose of the project was to investigate whether the different methods could be merged into one common method. By combining the methods, product costs will be reduced and work capacity associated with daily preparation and analysis will be freed up. In addition, a merging of the methods will lead to better instrument capacity.

It was investigated whether the analytes could be detected in the same method without impairing the analytical quality. The new method was based on the current method for lamotrigine in serum. The original quantification ion for mycophenolic acid gave a signal over the linear measuring range for the combined method. It was therefore necessary to map alternative quantification ions. Instrument settings were optimized to be able to distinguish and detect the quantification ions of both analytes in the same method. This included experiments with different variants of sample preparation and different injection volumes.

After completing the method development, a prevalidation was performed to examine how suitable the optimized method was for a full validation. The prevalidation showed that the method's accuracy, repeatability and linearity in the measuring range were well within the acceptance criteria. The specificity tests showed that neither internal standard nor matrix led to interference of analyte signal. By assessing the yield for the method, it was shown that the sample preparation did not lead to a significant loss of analyte. In addition, the prevalidation showed that prepared samples had a good durability when reinjected after three days on the instrument.

Based on the results from method development and prevalidation, the analytes lamotrigine and mycophenolic acid can be quantified in a combined method, without compromising analytical quality. The method is thus suitable for a complete validation, and is considered a possible alternative to current individual analyzes.