| dc.description.abstract | Cytokiner er små signalmolekyler som er viktige i kommunikasjonen mellom celler og i reguleringen av immunresponser [1]. Produksjonen av cytokiner er nøye kontrollert, og det er mange signalkaskader som ender med syntetisering av slike molekyler [2, 3]. Et eksempel er knyttet til aktivering av enzymet cytosolisk fosfolipase A2 (cPLA2) som har vist seg å spille en viktig rolle i inflammatorisk signalisering og er med i reguleringen av cytokinproduksjon og aktivitet [4]. cPLA2 katalyserer frigjørelse av arakidonsyre (AA) i fosfolipid-membranen [5]. AA kan videre metaboliseres til proinflammatoriske mediatorer kalt eikosanoider via tre signalveier regulert av enzymene cyklooksygenase 1/2 (COX1/2), lipoxygenase (LOX) og cytokrom p450 epoxygenase (CYP450) [6]. Eikosanoidene kan videre påvirke aktivering av transkripsjonsfaktoren nuclear factor-kB (NF-kB) som regulerer genuttrykk av proinflammatoriske cytokiner som interleukin-6 (IL-6) [7-10]. Forskning har vist at ulike hemmere for cPLA2 og COX1/2 har en anti-inflammatorisk effekt på produksjonen av eikosanoider [11-13].
Det er lite forskning knyttet til ex vivo deteksjon av cytokiner når hemmere for cPLA2 og COX1/2 er tilsatt menneskelig blod. For å få kunnskap om den systemiske effekten enkelte cPLA2 og COX1/2-hemmerne gir, er det av den grunn blitt utført deteksjon av IL-6 i helblod fra tolv friske, mannlige donorer ved bruk av analysemetoden enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Dette etter stimulering med LPS (µg/ml) og behandling med hemmerene; AVX002, AVX420, Arachidonyl-Trifluoromethyl Keton (ATK) mot cPLA2 (10 og 30 µM), og COX1/2-hemmeren indometacin (3 µM). Det er flere modeller og prosedyrer som kan benyttes ved ex vivo forsøk. For å optimalisere forsøksdesignet for fremtidige studier er det derfor blitt utført litteratursøk på tre ulike modellsystemer; helblodsmodellen, bruk av perifere mononukleære blodceller (PBMC) og isolerte celler. Jeg har sett på fordeler og ulemper ved modellene, samt den prosedyremessige utførelsen.
Under deteksjon av IL-6 ble det bekreftet at LPS er en god induser av inflammasjon, men det ble ikke funnet reduksjon i IL-6 når hemmere for cPLA2α og COX1/2 var tilsatt. Det ble derimot funnet stor individuell variasjon og en noe redusert mengde IL-6 i supernatant etter lagring ved -80°C. Siden det ble detektert kun er ett proinflammatorisk cytokin i denne studien, må flere mediatorer detekteres for å få et mer helhetlig bilde over det komplekse miljøet i blodet. For å optimalisere metoden for fremtidige ex vivo forsøk vil jeg foreslå å redusere mengde LPS fra 1 µg/ml til 10 ng/ml. Samtidig vil jeg foreslå å teste ulike tidskurver der flere tidspunkt enn 24 timer inkubering inngår. I tillegg vil jeg anbefale å kjøre omfattende dose-respons forsøk der flere konsentrasjoner for de ulike hemmerne testes. Forslag til konsentrasjoner er 10 og 20 µM for AVX002, AVX420 og ATK, samt 3, 10 og 20 µM for indometacin. Disse endringene kan benyttes i helblodsmodellen, men for Avexxin s fremtidige forsøk vil jeg foreslå å bruke optimaliseringene i en annen modell, PBMC. Dette fordi helblod inneholder mange komponenter som kan påvirke hemmernes og LPS effekt. Ved å skille ut PBMC fra erytrocytter, blodplater og polymorfonukleære (PMN)-celler, fjernes derfor noen av disse faktorene og man vil muligens få et mer presist svar på hvordan hemmerne fungerer systemisk etter at de er bundet til sitt spesifikke mål. | nb_NO |
