Validering av en UPLC-MSMS metode for kvantifisering av klozapin, kvetiapin, mirtazapin og deres metabolitter i fullblod.

Abstract

Validering av metode for kvantifisering av antipsykotika (klozapin og kvetiapin) og antidepressiva (mirtazapin) og deres metabolitter (DM-klozapin, DA-kvetiapin, DM-mirtazapin) i fullblod med bruk av serummatriks som standard ble gjennomført på UPLC-MSMS. Fullblod er det vanligste av de tilgjengelige prøvematerialene ved analyse av postmortale prøver. Analyse av slike prøver er aktuelt for å undersøke tilstedeværelse eller konsentrasjon av antipsykotika eller antidepressiva i avdøde. Metodens prøveopparbeidelse var proteinfelling og filtrering med acetonitril og OstroTM -plate. Separasjonsprinsippet var omvendt fase-kromatografi og deteksjonen var tandem massespektrometer. Valideringsparameterne for validering av metoden var å undersøke signal-til-støy forhold, nedre kvantifiseringsgrense, linearitet, repeterbarhet, reproduserbarhet, nøyaktighet og holdbarhet. Resultatene fra analysene ble sammenlignet med akseptkriterier fra laboratoriet. Resultatene viste at den nedre deteksjonsgrensen kan beholdes siden alle S/N-forhold var godt innenfor S/N-kravet på over 30. Metoden hadde god linearitet (gjennomsnittlig R>0,9998). I tillegg var serum-standardkurve sammenfallende fullblod-standardkurve. Det var derfor mulig å bruke serumstandarder til analyse av fullblodsprøver. Resultatene for repeterbarhet var alle innenfor kravet på ≤10%. Reproduserbarhet og nøyaktighet hadde også alle resultater innenfor oppgitte krav på ≤15%. Holdbarheten til analyttene i dypbrønnsplaten viste god holdbarhet fram til og med dag 5. Dermed kan opparbeidede prøver analyseres etter oppbevaring i fem dager ved 10°C. Undersøkelsen har vist at det er mulig å kvantifisere medikamentene (klozapin, kvetiapin og mirtazapin) og metabolittene (DM-klozapin, DA-kvetiapin og DM-mirtazapin) i fullblod med serummatriks som standard. Holdbarheten til opparbeidede prøver i dypbrønnsplaten er satt til fem dager ved 10°C.

Validation of a method for quantification of antipsychotics (Clozapine, Quetiapine) and antidepressants (Mirtazapin) and their metabolites (DM-clozapine, DA-quetiapine, DM-mirtazapine) in whole blood using serummatrix as a standard, was carried out on UPLC-MSMS. Whole blood is the most common of the available sample material when analyzing postmortem samples. Analysis of postmortem samples is relevant to examine the presence or concentration of the analytes and their metabolites in a deceased person. The sample preparation included protein precipitation and filtration with acetonitrile and OstroTM-plate. The separation principle was reverse phase chromatography, and the detection was tandem mass spectrometer. The validation parameters for the validation of the method included looking into the signal/noise ratio, lower limit of quantification, linearity, precision, accuracy and durability. The results were compared to the laboratory´s acceptance criteria. The results showed that the lower detection limit can be retained because all the S/N values were well within the requirement of ≥ 30. The method had good linearity (average R>0,9998). The serum calibration curve was coinciding with the whole blood calibration curve. It was therefore possible to use serum standards for analysis of samples in whole blood. The results from the repeatability were within the stated requirements on ≤10%. Reproducibility and accuracy also had results within stated requirements on ≤15%. The durability results of the analytes in the 96-well plate, showed good durability up to day 5. Therefore, processed samples can be analyzed after five days storage at 10°C. The validation experiments have shown that it is possible to validate the medicaments (Clozapine, Quetiapine, Mirtazapine) and the metabolites (DM-Clozapine, DA-Quetiapine, DM-Mirtazapine) in whole blood with serummatrix used as standard. The durability of processed samples in the plate is set to five days at 10 °C.