Indusering av HaCaT-cellelinje med TNF-α for å studere oppregulering av IL-23 og mulig antiinflammatorisk effekt av dokosaheksaensyre

Abstract

Målet med denne oppgaven var å undersøke om TNF-α kunne oppregulere ekspresjonen av IL-23 i HaCaT-celler. I tillegg ble forsøket gjentatt, men denne gangen parallelt med DHA-behandling av cellene. Dette for å studere om fettsyren kunne motvirke en eventuell oppregulering av IL-23. Induseringen varte i inntil tre timer, og for hver time ble cellene høstet og RNAet isolert. For å studere genekspresjonen ble RT-qPCR benyttet. Oppreguleringen av IL-23-ekspresjonen ble beregnet ved å bruke ΔΔCt-metoden, med både referansegener og kontroller, og resultatene ble statistisk analysert. For å se om DHA hadde hatt en effekt, ble ekspresjonen av IL-23 også sammenlignet mellom prøvene med og uten DHA-behandling. Resultatene fra den statistiske analysen viste en signifikant oppregulering av IL-23 etter én times indusering av TNF-α. Denne oppreguleringen kunne ikke påvises hos cellene med DHA-behandling, men det var ikke en signifikant forskjell mellom oppreguleringen i prøvene med og uten DHA-behandling. En svakhet ved denne oppgaven var imidlertid at det lå for få paralleller av de ulike prøvene til grunn for å kunne si noe om repeterbarheten av forsøket.

The aim of this study was to investigate if TNF-α could upregulate the expression of IL-23 in HaCaT cells. Additionally, the experiment was repeated, only this time the cells were treated with DHA in parallel to study if the fatty acid could prevent a potential upregulation of IL-23. The induction lasted up to three hours, where the cells were harvested once every hour followed by isolation of RNA. To study the gene expression, RT-qPCR was utilized. The upregulation of the IL-23 expression was calculated using the ΔΔCt method, with both reference genes and controls, and the results were statistically analysed. Additionally, to see if DHA had an effect, the expression of IL-23 was compared between the samples with and without DHA treatment. The results from the statistical analysis showed a significant upregulation of IL-23 after one hour of induction with TNF-α. This upregulation could not be proven in the DHA treated cells, but there was no significant difference in the upregulation between the samples with and without DHA treatment. A weakness of this study was the few parallels of the different samples, it was therefore not possible to comment on the repeatability of the experiment.