Bruk av anaerob pre-inkubering for forbedring av metode for påvisning av Aeromonas i matvarer

Abstract

Hovedmålet med denne bacheloroppgaven var å se om en kort anaerob pre-inkubering kunne øke selektiviteten til SAA- medium for Aeromonas-arter i matvarer. Denne problemstillingen tok utgangspunkt i en påvisningsmetode utviklet av NMKL (nordisk metodikkomité for næringsmidler) for påvisning av Aeromonas i mat. Kolonier av Aeromonas vil typisk gi honninggule mellomstore kolonier på SAA-medium etter 24 timer aerob inkubering ved 37 °C, men ved tilstedeværelse av Pseudomonas vil kolonier ligne hverandre, som gjør identifisering problematisk. Et annet selektivt medium, Aeromonas medium base (Ryan) ble også benyttet som parallell til SAA for å sammenligne egnethet for påvisning av Aeromonas. Et utvalg isolater av Aeromonas og Pseudomonas fra ulike kilder ble dyrket opp på generelt vekstmedium (TSA). Isolater med vekst etter to døgn ble strykt ut på SAA og Ryan og inkubert aerobt og anaerobt for studering av koloniutseende. Et isolat fra Aeromonas og Pseudomonas ble benyttet til test av co-kulturer med høy, middels og liten mengde av de valgte isolatene. To sett ble laget av hver co-kultur, ett sett til anaerob pre-inkubering og ett sett til aerob inkubering i henhold til NMKL-metoden på både SAA og Ryan. Salat og laks ble benyttet for isolering av Aeromonas fra matvarer med naturlig kontaminering. Det ble veid ut prøver fra hver matvare, homogenisert og stryket ut på to sett SAA og Ryan med samme inkuberingsbetingelser som for co-kulturene. Beregnet kimtall for to av co-kulturene viste at andel Aeromonas i co-kulturene med anaerob pre-inkubering økte betydelig på bekostning av andel Pseudomonas, sammenlignet med co-kulturene uten pre-inkuberingen. Uten anaerob pre-inkubering vokste begge slektene likt på SAA og Ryan. Aeromonas-kolonier var større enn Pseudomonas-koloniene. Test med laks viste at kimtall var høyere på skåler med presumtiv Aeromonas, og at høyeste kimtall var på SAA med anaerob pre-inkubering. Presumtiv Aeromonas uten pre-inkuberingen vokste best på Ryan. Test med salat viste at kimtall var høyere på skålene med presumtiv Aeromonas, og at kimtall var høyest for presumtiv Aeromonas på SAA med den anaerobe pre-inkuberingen. Det ble konkludert at pre-inkubering ga høy selektivitetsøking av SAA for påvisning av Aeromonas i co-kultur og hadde en mindre men merkbar effekt i matvarer med naturlig kontaminering. SAA viste seg å være mest egnet på påvisningen av Aeromonas-arter.

The main objective of this bachelor was to examine if a short anaerobic pre-incubation could increase the selectivity of SAA-medium for Aeromonas spp. This problem was based on a detection method developed by NMKL (nordic commitee of food analysis) for detection of Aeromonas in food. Colonies of Aeromonas will typically present as honey-yellow and medium-sized on SAA after a 24-hour aerobic incubation at 37 °C, but if present colonies of Pseudomonas could resemble and make identification problematic. Another selective medium, Aeromonas medium base (Ryan) was also used, working as a parallell to SAA to see which medium had the best suitability. A variety of isolates of Aeromonas and Pseudomonas from different sources were grown on general growth medium (TSA). Isolates with growth after two days were transferred and grown on SAA and Ryan, before being incubated aerobically and anaerobically. One isolate of Aeromonas and Pseudomonas were used to conduct testing of co-cultures consisting of high, medium and low ratio of the chosen isolates. Two sets of each co-culture were made, one set was to undergo an anaerobic pre-incubation, while the other recieved an aerob incubation according to the NMKL method, both on SAA and Ryan. Lettuce and salmon was used for the isolation of Aeromonas from food with natural contamination. Each food was sampled, homogenized, and distributed onto two sets of SAA and Ryan and incubated using the same incubation conditions as previously used for the co-cultures. Calculated germ count for two of the co-cultures that underwent an anaerobic pre-incubation, showed that there was an increase in proportion of Aeromonas in the co-culture at the expense of the proportion Pseudomonas compared to co-cultures that recieved no pre-incubation. Without an anaerobic pre-incubation, both genus grew equally on SAA and Ryan. Colonies of Aeromonas were larger than colonies of Pseudomonas. The results from isolation of Aeromonas from food showed that the salmon had a germ count that in total was higher for presumed Aeromonas, but also that the highest germ count was registered on SAA with an anaerobic pre-incubation. Presumed Aeromonas without an anaerobic pre-incubation had the best growth on Ryan. The results from the lettuce revealed that the germ count here too in total was higher for presumed Aeromonas, and that the germ count was the highest for presumed Aeromonas on SAA with the anaerobic pre-incubation. It was concluded that pre-incubation gave a high selectivity for SAA for the detection of Aeromonas in co-cultures, and that the same effect was observed after testing with food with natural comtamination, however at a lower degree. SAA was precieved as the most suitable for detection og Aeromonas species.