Sammenligning av selektive dyrkningsmedier for påvisning av Aeromonas

Abstract

Metoden for påvisning av Aeromonas utarbeidet av Nordisk Metodikkomité for næringsmidler (NMKL) er ikke optimal. Dyrkningsmediet Stivelses Ampicillin Agar (SAA) som blir benyttet etter denne standarden har vist seg å være lite selektivt og tidskrevende å produsere. Uten flere verifiseringstester er det derfor vanskelig å påvise Aeromonas fra næringsmidler med en blandet mikroflora.

Hovedmålet med denne bacheloroppgaven var å sammenligne stivelse ampicllin agar (SAA) med to andre kommersielle selektive dyrkningsmedier. Disse var følgende: “Bile Salt Irgasan Brilliant Green agar” (BSIBG) og Aeromonas agar (Ryan).

Oppgavens første delmål var å dyrke opp Aeromonas- og sammenligne og dokumentere deres vekst på de tre selektive mediene.

For å undersøke medienes evne til å isolere Aeromonas fra en blandet mikroflora ble det tatt bakteriologiske analyser av laks, reker, røye, salat og spirer. Det ble både tatt analyser av den naturlig tilstedeværende mikrofloraen i næringsmidlene, i tillegg til lakseprøver som var kunstig kontaminert med en Aeromonas-kultur. Et utvalg av kolonier ble plukket for videre verifisering. Det ble utført polymerase chain reaction (PCR) av 16S rRNA for identifisering av presumtive og ikke-presumtive Aeromonas-isolater fra næringsmiddelprøvene. PCR-produktene ble sendt til sekvensering til et eksternt laboratorium.

Resultatene viste små forskjeller mellom SAA og BSIBG sin evne til å inhibere ikke-Aeromonas arter, Ryan ble vist til å ha noe dårligere selektivitet. Det kunne ikke identifiseres Aeromonas fra noen næringsmidler med unntak av de kunstig kontaminerte prøvene. Ved tilsetning av kulturen viste alle mediene evne til å gjenfinne Aeromonas, men det lyktes ikke å kvantifisere Aeromonas med tilsvarende konsentrasjon som ble tilsatt lakseprøven. Pseudomonas viste seg å være en dominerende slekt på flere av produktene og hadde et lignende koloniutseende som Aeromonas på både SAA og Ryan.

På grunn av BSIBG sin evne til å differensiere enkelte Pseudomonas-arter med et koloniutseende som skiller seg fra Aeromonas, og i tillegg til at mediet er svært enkelt å tillage, kan det være et bedre alternativ enn SAA.

The method for the detection of Aeromonas prepared by the Nordic Committee on food analysis (NMKL) is not optimal. The culture medium Starch Ampicillin Agar (SAA) according to this standard has been shown to be poor in selectivity and time consuming to produce. Therefore, without several verification tests, it is difficult to detect Aeromonas in foods with a diverse microflora.

The main objective of this bachelor thesis was to compare starch ampicillin agar with two other commercial selective culture media. These were the following: "Bile Salt Irgasan Brilliant Green Agar" (BSIBG) and Aeromonas agar (Ryan).

The thesis first task was to cultivate Aeromonas species and compare and document their growth on three selective media.

To investigate the ability of the media to isolate Aeromonas from a diverse microflora, bacteriological analyzes of salmon, shrimp, char, lettuce and sprouts were taken. Analyzes of the naturally present microflora in the food were taken, as well as salmon samples that were artificially contaminated with an Aeromonas culture. A variety of colonies were picked for further verification. Polymerase Chain Reaction (PCR) of 16S rRNA was performed to identify presumptive and non-presumtive Aeromonas isolates from the food samples. The PCR products were sent for sequencing to an external laboratory.

The results showed a slight difference between SAA and BSIBG's ability to inhibit non-Aeromonas species, Ryan was shown to have somewhat poorer selectivity. Aeromonas could not be identified from any food except for the artificially contaminated samples. Upon addition of the culture, all the media showed the ability to identify Aeromonas, but it was not possible to quantify Aeromonas with a similar concentration that was added to the salmon samples. Pseudomonas proved to dominate the microflora in several of the products and had a similar colony appearance to Aeromonas on both SAA and Ryan.

Due to BSIBG's ability to differentiate certain Pseudomonas species with a colony appearance that differs from Aeromonas, and in addition to the medium being easy to prepare, it may be a better option than SAA.