| dc.description.abstract | Mikroskopiske plantealger kan danne marine algetoksiner i svært lave konsentrasjoner, og disse algetoksinene kan under gitte forhold akkumulere i skjell. I næringsmiddelsammenheng kan inntak av giftige skjell føre til alvorlige forgiftninger eller død.Det finnes fire ulike grupper av marine algetoksiner: diarégivende, paralyserende, nevrotoksiske og det såkalte hukommelsestaptoksinet. De fettløselige algetoksinene okadasyre, dinophysistoksiner, azaspiracid toksiner, pectenotoksiner, yessotoksiner, spirolider og gymnodiminer danner en gruppe komponenter som kalles lipofile algetoksiner. I henhold til regelverkskravet fra myndighetene for å sikre folkehelsen, skal forekomster og konsentrasjoner av lipofile algetoksiner i skjell overvåkes. Inntil nylig har biologisk testing i mus vært referansemetoden innen EU for påvisning av toksiske nivåer av lipofile algetoksiner i skjellmat. Dette er nå endret slik at det skal benyttes kjemiske analysemetoder hvor væskekromatografi kombineres med tandem-massespektrometri (LC-MSMS).Målet med denne oppgaven var å gjøre en vurdering av LC-MSMS-metodene som er foreslått i EU-Harmonised Standard Operating Procedure for determination of Lipophilic marine biotoxins in molluscs by LC-MSMS (EU-SOP). To av metodene som beskrives i EU-SOP (sur og basisk metode) ble sammenlignet med pH-nøytral metode (LC-MS). Den sistnevnte er siden 2007 blitt benyttet rutinemessig ved Avdeling for Klinisk Farmakologi, St Olavs Hospital.For de fleste toksinene var alle kvalitetskriterier ved de tre undersøkte elueringsbetingelsene i samsvar med hva EU-SOP anser som akseptabelt ved kvantitativ analyse. Det ble påvist forskjeller mellom metodene, både når det gjaldt kromatografisk toppfasong, linearitet og endringer i instrumentfølsomhet i løpet av analyseserien, så vel som signal-til-støy forhold. Kromatografiske betingelser hadde relativt stor effekt på følsomhet og matrikseffekt. pH nøytral metode viste generelt minst matrikseffekt, selv om matriksstyrken var høyest i ekstraktene som ble analysert på LC-MS. Både sur og basisk metode krever tiltak for å håndtere matrikseffekt for de fleste toksinene og dermed redusere kvantifiseringsfeil.Denne studien viste at matrikseffekt kan være artsavhengig, og at graden av matrikseffekt kan variere med årstid. Variasjon i matrikspåvirkning innen kamskjell relatert til de undersøkte årstidene, var større enn variasjonen innen blåskjell. Resultatene tyder på at valg av kamskjell som blankmateriale for standardkurve bør følge inneværende sesong. Det ble utført sammenligning av toksinkonsentrasjon i naturlig kontaminerte skjell ved standardaddisjon og kvantifisering ved bruk av matriksmatchende standardkurve. Resultatene viste at matriksmatchende standarder i stor grad eliminerte matrikseffekten. I tillegg antydet resultatene at toksinestimering i blåskjell og kamskjell kan gjøres ved å bruke samme kalibreringsmatriks, selv om egen matriks som kalibreringsmatriks ga noe bedre resultater for nøyaktighet og presisjon. Undersøkelse i forbindelse med innføring av potensielle internstandarder viste utfordringer i forhold til å finne egnede forbindelser som er i stand til å kompensere for responsvariasjon og matrikseffekt ved analyse av lipofile algetoksiner. Lovende resultater ble indikert for enkelte toksiner, men ytterligere undersøkelser er nødvendig for å kunne konkludere.Alle tre metodene er egnet for bestemmelse av marine algetoksiner. Imidlertid må matrikseffekt vurderes nøye og tas i betraktning før kvantifisering av toksininnhold. Total analysetid ble betydelig redusert ved bruk av LC-MSMS-metodene. Muligheten ved bruk av dynamisk MRM som sørger for rask polaritetsbytte, fjerner kravet til full baselinjeseparasjon i tillegg til å gi høy sensitivitet ved analyse av komplekse prøver som inneholder mange analytter i lav konsentrasjon i ulike matrikser. Likevel må enkelte kompromisser ofte gjøres i analytiske metoder som inkluderer mange forbindelser, og valget av en rutinemetode for toksinovervåking bør gjøres med vekt på forventet toksinprofil i skjellene. | nb_NO |
